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蛋白轉運抑制劑(含莫能菌素)離體添加到體外或體內刺激的淋巴細胞中,可阻斷其細胞內蛋白質轉運過程。這導致細胞因子和/或蛋白質在高爾基復合體中積累。細胞因子在細胞中積累的增加增強了流式細胞術分析對產生細胞因子的細胞的可檢測性。
蛋白轉運抑制劑(含莫能菌素)
刺激細胞:已經報道了各種 體外刺激細胞產生細胞因子的方法。多克隆激活劑對于誘導產生細胞因子的細胞特別有用。這些激活劑包括:伴刀豆球蛋白 A、脂多糖、佛波酯加鈣離子載體或離子霉素、植物血凝素、葡萄球菌、腸毒素 B 和針對 TCR/CD3 復合物亞基的單克隆抗體(有或沒有針對共刺激受體的抗體,如 CD28)。
BD GolgiStop™ 的使用程序: 每 6 mL 細胞培養物(例如,~10^6 個細胞/mL)加入 4 μl BD GolgiStop™,并充分混合。用 BD GolgiStop™ 處理受刺激的細胞 4 至 6 小時可顯著提高通過免疫熒光染色檢測產生細胞因子的細胞的能力。建議BD GolgiStop™在細胞培養物中的保存時間不要超過12小時。
作為 BD GolgiStop™ 的替代品,研究人員可能希望使用 BD GolgiPlug™,一種含有布雷菲德菌素 A 的蛋白質轉運抑制劑(貨號。第 555029 號)。已發現 BD GolgiStop™ 和 BD GolgiPlug™ 對細胞內細胞因子染色具有不同的影響,即時間、激活劑和細胞因子依賴性。在進行細胞內染色時必須考慮這些因素。
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